应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 启动子克隆的相关问题
151/2返回列表12下一页
查看: 2850  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 启动子克隆的相关问题 已有3人参与

最近在做启动子的克隆，设计了好几对引物，其中一对引物有目的条带，我就把它回收回来，然后与T载体连接，转化，涂板，挑单克隆，做PCR检测，然后阳性单克隆摇菌提质粒，做了酶切检测，也是对的，但是拿去测序后，结果不是我要的结果，这应该怎么办呢？存在什么样的问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-04-25 11:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

meng蓝色桃子

新虫 (初入文坛)
克启动子经常会遇到这样的问题，重新跑PCR，可以考虑换高保增酶

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-05-04 00:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海燕追梦

新虫 (正式写手)
启动子弄的我都想哭

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2017-05-17 21:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

123小木鱼

新虫 (初入文坛)
也在克隆启动子，遇到同样的问题，快郁闷死了
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2018-01-15 10:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
换一对测序引物

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2017-04-25 15:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-18 07:43:13
可能是引物不够特异，你可以调取比较长的片段，然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
4楼2017-05-04 00:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纪孟君

新虫 (初入文坛)
想知道解决了没，我也遇到相同的情况

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
大雨也要等到晴朗
5楼2017-05-05 19:25:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by meng蓝色桃子 at 2017-05-04 00:11:27
克启动子经常会遇到这样的问题，重新跑PCR，可以考虑换高保增酶

我已经换了4对引物了，然而还是没有扩增出来，条带很杂乱，感觉没有目的条带，而且也换过KOD酶试过，还是不行。
赞一下 回复此楼
6楼2017-05-17 20:35:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 纪孟君 at 2017-05-05 19:25:04
想知道解决了没，我也遇到相同的情况

还是没有解决呢
回复此楼
7楼2017-05-17 20:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2017-05-04 00:15:07
可能是引物不够特异，你可以调取比较长的片段，然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

我换过引物，扩增的长度也有大有小，然而还是扩不出来
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-17 20:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暖暖岁月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知您问题解决没，一般情况下换用高保真酶，克隆鉴订结果条带一样但测序结果不一样一般再重设引物就行了。我遇到过这种问题。
赞一下 回复此楼
9楼2017-05-17 20:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雪鸢-lx 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭