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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 启动子克隆的相关问题
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 启动子克隆的相关问题 已有3人参与

最近在做启动子的克隆，设计了好几对引物，其中一对引物有目的条带，我就把它回收回来，然后与T载体连接，转化，涂板，挑单克隆，做PCR检测，然后阳性单克隆摇菌提质粒，做了酶切检测，也是对的，但是拿去测序后，结果不是我要的结果，这应该怎么办呢？存在什么样的问题？
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1楼 2017-04-25 11:28:55
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暖暖岁月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知您问题解决没，一般情况下换用高保真酶，克隆鉴订结果条带一样但测序结果不一样一般再重设引物就行了。我遇到过这种问题。
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9楼2017-05-17 20:44:09
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
换一对测序引物

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2楼2017-04-25 15:42:10
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meng蓝色桃子

新虫 (初入文坛)
克启动子经常会遇到这样的问题，重新跑PCR，可以考虑换高保增酶

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3楼2017-05-04 00:11:27
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-18 07:43:13
可能是引物不够特异，你可以调取比较长的片段，然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
4楼2017-05-04 00:15:07
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