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求助PCR以前能出条带现在却没有了 已有1人参与
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大四作为毕设，时间没多少了，pcr又出问题，求各位大神帮忙了！ 1.一开始是用老师提的基因组为模板，做了很多次都有条带； 2.后来老师提的基因组快用完了，我就自己提了基因组（模板浓度稀释到和之前一样），做50ul*5的大体系，大孔全部上样，条带很浅，曝光才能看到 3.为了优化，我又做了25ul的小体系，模板浓度加倍、减半，又设置了4个梯度退火温度，一共六管样品，10ul上样全无条带！只有很亮的引物二聚体。 4.今天又试了一次，把之前老师提的基因组剩下的一点点拿来做阳性对照，结果也没有条带 自己想法： 1.所以反应体系和反应温度都没有改变，唯一记得有不同的是3和4用的taq酶是没有加甘油的，我有查到甘油会影响特异性，不过现在不是杂带的问题而是不出条带的问题。 2.如果说是操作中的偶然失误的话，我不至于做了那么多管一管都没出条带吧 3.还有大体系有条带怎么小体系就没有了？ |
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