| 查看: 1838 | 回复: 12 | ||
[求助]
求助PCR以前能出条带现在却没有了 已有1人参与
|
||
|
大四作为毕设，时间没多少了，pcr又出问题，求各位大神帮忙了！ 1.一开始是用老师提的基因组为模板，做了很多次都有条带； 2.后来老师提的基因组快用完了，我就自己提了基因组（模板浓度稀释到和之前一样），做50ul*5的大体系，大孔全部上样，条带很浅，曝光才能看到 3.为了优化，我又做了25ul的小体系，模板浓度加倍、减半，又设置了4个梯度退火温度，一共六管样品，10ul上样全无条带！只有很亮的引物二聚体。 4.今天又试了一次，把之前老师提的基因组剩下的一点点拿来做阳性对照，结果也没有条带 自己想法： 1.所以反应体系和反应温度都没有改变，唯一记得有不同的是3和4用的taq酶是没有加甘油的，我有查到甘油会影响特异性，不过现在不是杂带的问题而是不出条带的问题。 2.如果说是操作中的偶然失误的话，我不至于做了那么多管一管都没出条带吧 3.还有大体系有条带怎么小体系就没有了？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有209人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR问题求助
已经有16人回复
- 【求助/交流】寻求用通用引物进行菌落PCR，无条带的原因
已经有3人回复
- 【求助/交流】PCR以前能出来目的条带，现在一直弥散，诸位帮忙分析一下
已经有4人回复
lusandanooo
银虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 132.1
- 散金: 3
- 红花: 5
- 帖子: 260
- 在线: 96.2小时
- 虫号: 4149251
- 注册: 2015-10-16
- 性别: GG
- 专业: 林产化学
6楼2017-04-14 14:59:02
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2017-04-13 23:08:43
2楼2017-04-13 18:13:11
lusandanooo
银虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 132.1
- 散金: 3
- 红花: 5
- 帖子: 260
- 在线: 96.2小时
- 虫号: 4149251
- 注册: 2015-10-16
- 性别: GG
- 专业: 林产化学
7楼2017-04-14 15:01:01
lusandanooo
银虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 132.1
- 散金: 3
- 红花: 5
- 帖子: 260
- 在线: 96.2小时
- 虫号: 4149251
- 注册: 2015-10-16
- 性别: GG
- 专业: 林产化学
10楼2017-04-14 15:50:33
3楼2017-04-13 19:04:23
5楼2017-04-13 23:38:26
8楼2017-04-14 15:18:42
9楼2017-04-14 15:34:16