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胖妞光芒万丈新虫 (初入文坛)
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[求助]
关于His-Tag的一些疑问 已有2人参与
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食品方向，涉及分子生物学，求助各位大神。 1.将编码酶的基因插入质粒，为了便于后期的蛋白分离纯化，需要插入HIS-TAG，据说要在标签之后再插入一小段无关的序列，想问下插入的这段碱基序列有标准吗？ 2.目的基因与标签之间要设置酶切位点，目的是什么呀？酶切位点不是切基因的吗，但是标签的6个组氨酸不是要翻译出来跟目的蛋白一起分离纯化吗？ |
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 蛋白表达纯化鉴定精华 | 蛋白纯化 |
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2楼2017-02-23 10:56:05
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
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3楼2017-02-23 14:40:46
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-24 08:46:16
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-24 08:46:16
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1.无关序列指的是在标签和目的蛋白之间的一个linker，一般长度为10~15个氨基酸，且为疏水性氨基酸，目的是为了防止标签被目的蛋白包裹而不利于纯化. 2.酶切位点是为了在纯化之后切除标签，从而排除标签对后期实验的影响 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-02-23 17:41:14
胖妞光芒万丈
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5楼2017-02-23 21:47:41
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8楼2017-02-26 17:31:24
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sorry，不应该笼统的说是疏水氨基酸，比较普遍的是（G4S）n linker，G4S 为4个甘氨酸1个氨酸，具体你可以参阅网上资料。另外，不好意思这么久才回复，还没有养成天天关注小木虫的习惯 发自小木虫Android客户端 |
9楼2017-03-10 15:36:50
10楼2017-03-10 15:39:48
