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酵母表达载体PYES-DEST52的使用问题，高手请进
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在Invitrogen公布的关于 pYES-DEST52 使用说明书中有这么一段话 Your insert should contain a yeast consensus sequence for proper initiation of translation, although this requirement is not as stringent in yeast (Cigan and Donahue, 1987; Romanos et al., 1992). An example of a yeast consensus sequence is provided below (Romanos et al., 1992). Note that a “U” at position –3 decreases expression 2-fold. The AUG initiation codon is shown underlined. (A/Y) A (A/U) A AUGUCU If you wish to include the V5 epitope and 6xHis tag, your gene in the entry clone should not contain a stop codon. In addition, the gene should be designed to be in frame with the C-terminal epitope tag after recombination. Refer to the Recombination Region on the next page. If you do NOT wish to include the V5 epitope and 6xHis tag, be sure that your gene contains a stop codon in the entry clone 以下两个： 1. 第一段的意思是要在我的基因的其实密码子ATG之前要加上(A/Y) A (A/U) A AUGUCU这段序列供酵母识别用的吗？是不是在酵母中表达外源基因都需要加上供酵母识别的序列呢？ 2. 假设我不需要用载体上的V5以及His标签的话，是不是只需要把我基因从其实密码子ATG到终止密码子TGA克隆到pYES-DEST52上就可以了呢？ 初步接触酵母这套体系，很多问题不是很清楚，拿捏不好哪里是关键点。希望得到各位大侠的指导，先谢过了！ |
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