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xms0422

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助蛋白表达!!!急 已有1人参与

本人真的是生物小白一个,毕业课题是一个蛋白的表达,现已构建载体。接下来准备诱导表达,请问,我在摸表达的条件时,是不是要同时取菌液离心后的上清和沉淀,沉淀再重悬,破碎后再上胶?另外,由于蛋白较大100多kD ,请问破碎后上交跑会不会有杂带影响目的条带的鉴别?求助各位大神!

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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
诱导表达出来的蛋白条带会比较亮的
2楼2016-12-13 10:00:29
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六六六六六

新虫 (小有名气)

要是担心杂蛋白影响你的目的蛋白你做个对照就好了

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3楼2016-12-13 14:26:35
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lfgx1314

金虫 (著名写手)

资深IVD开发人员

你用的是大肠杆菌表达吧!一般大肠杆菌表达很少取菌液离心上清的,取的是菌破碎后的上清和沉淀进行上胶跑电泳,另外你做的蛋白分子量很大啊!序列如果优化不好是不会有蛋白表达或表达很低的。跑胶是必须要破碎后的,控制一下上样量,目的条带一般会很容易分辨的。这个不用担心。
永远处于沙漠边缘的行者
4楼2016-12-13 16:07:39
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xms0422

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lfgx1314 at 2016-12-13 16:07:39
你用的是大肠杆菌表达吧!一般大肠杆菌表达很少取菌液离心上清的,取的是菌破碎后的上清和沉淀进行上胶跑电泳,另外你做的蛋白分子量很大啊!序列如果优化不好是不会有蛋白表达或表达很低的。跑胶是必须要破碎后的, ...

请问序列优化不好是什么意思?

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5楼2016-12-13 22:23:37
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