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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助蛋白表达！！！急
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xms0422

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助蛋白表达！！！急 已有1人参与

本人真的是生物小白一个，毕业课题是一个蛋白的表达，现已构建载体。接下来准备诱导表达，请问，我在摸表达的条件时，是不是要同时取菌液离心后的上清和沉淀，沉淀再重悬，破碎后再上胶？另外，由于蛋白较大100多kD ，请问破碎后上交跑会不会有杂带影响目的条带的鉴别？求助各位大神！

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1楼 2016-12-13 09:00:30
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
诱导表达出来的蛋白条带会比较亮的
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2楼2016-12-13 10:00:29
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六六六六六

新虫 (小有名气)
要是担心杂蛋白影响你的目的蛋白你做个对照就好了

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3楼2016-12-13 14:26:35
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lfgx1314

木虫 (著名写手)
你用的是大肠杆菌表达吧！一般大肠杆菌表达很少取菌液离心上清的，取的是菌破碎后的上清和沉淀进行上胶跑电泳，另外你做的蛋白分子量很大啊！序列如果优化不好是不会有蛋白表达或表达很低的。跑胶是必须要破碎后的，控制一下上样量，目的条带一般会很容易分辨的。这个不用担心。
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永远处于沙漠边缘的行者
4楼2016-12-13 16:07:39
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xms0422

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lfgx1314 at 2016-12-13 16:07:39
你用的是大肠杆菌表达吧！一般大肠杆菌表达很少取菌液离心上清的，取的是菌破碎后的上清和沉淀进行上胶跑电泳，另外你做的蛋白分子量很大啊！序列如果优化不好是不会有蛋白表达或表达很低的。跑胶是必须要破碎后的， ...

请问序列优化不好是什么意思？

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5楼2016-12-13 22:23:37
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