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wanglele0909

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达中抗性基因的表达 已有1人参与

大神们给解释一下。
我在试验中,原核表达目的蛋白OK!但是把诱导后的活菌进行涂板计数,1000000倍稀释后,在相应的抗性平板上,细菌不生长,在非抗性平板上生长。
问题:1原核表达载体中,抗性基因在载体上顺反与其表达有关吗(例如pet-30a和pet-22b比较)?2.抗性基因的表达在目的表达基因之后的,加 IPTG诱导表达之后,目的蛋白存在,活菌抗性会减弱吗?3.在原核表达中,抗性基因的工作原理?谢谢!急!!
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小冀-

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗性基因表达和你诱导目的基因的表达是两回事,他们启动子不一样,没影响的
···
2楼2016-11-16 22:07:35
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wanglele0909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-16 22:07:35
抗性基因表达和你诱导目的基因的表达是两回事,他们启动子不一样,没影响的

那为什么我的工程菌再诱导表达后,活菌稀释1000000倍后在抗性平板上不生长,在非抗性平板生长呢。我用的是BL21(DE3)
3楼2016-11-17 09:20:16
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小冀-

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanglele0909 at 2016-11-17 09:20:16
那为什么我的工程菌再诱导表达后,活菌稀释1000000倍后在抗性平板上不生长,在非抗性平板生长呢。我用的是BL21(DE3)...

可能菌株根本就不对~
···
4楼2016-11-17 09:25:02
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wanglele0909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-17 09:25:02
可能菌株根本就不对~...

SDS-PAGE电泳有目的条带,提质粒后用T7引物也能扩出目的条带。我的目的蛋白140KD
5楼2016-11-17 16:23:41
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小冀-

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wanglele0909 at 2016-11-17 16:23:41
SDS-PAGE电泳有目的条带,提质粒后用T7引物也能扩出目的条带。我的目的蛋白140KD...

那就邪门了,怎么可能涂板子会不长呢~
···
6楼2016-11-17 16:57:39
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