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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达中抗性基因的表达
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wanglele0909

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达中抗性基因的表达 已有1人参与

大神们给解释一下。
我在试验中，原核表达目的蛋白OK!但是把诱导后的活菌进行涂板计数，1000000倍稀释后，在相应的抗性平板上，细菌不生长，在非抗性平板上生长。
问题：1原核表达载体中，抗性基因在载体上顺反与其表达有关吗（例如pet-30a和pet-22b比较）？2.抗性基因的表达在目的表达基因之后的，加 IPTG诱导表达之后，目的蛋白存在，活菌抗性会减弱吗？3.在原核表达中，抗性基因的工作原理？谢谢！急！！
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1楼 2016-11-16 15:56:56
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小冀-

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗性基因表达和你诱导目的基因的表达是两回事，他们启动子不一样，没影响的
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···
2楼2016-11-16 22:07:35
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wanglele0909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-16 22:07:35
抗性基因表达和你诱导目的基因的表达是两回事，他们启动子不一样，没影响的

那为什么我的工程菌再诱导表达后，活菌稀释1000000倍后在抗性平板上不生长，在非抗性平板生长呢。我用的是BL21(DE3)
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3楼2016-11-17 09:20:16
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小冀-

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanglele0909 at 2016-11-17 09:20:16
那为什么我的工程菌再诱导表达后，活菌稀释1000000倍后在抗性平板上不生长，在非抗性平板生长呢。我用的是BL21(DE3)...

可能菌株根本就不对~
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4楼2016-11-17 09:25:02
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wanglele0909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-17 09:25:02
可能菌株根本就不对~...

SDS-PAGE电泳有目的条带，提质粒后用T7引物也能扩出目的条带。我的目的蛋白140KD
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5楼2016-11-17 16:23:41
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小冀-

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wanglele0909 at 2016-11-17 16:23:41
SDS-PAGE电泳有目的条带，提质粒后用T7引物也能扩出目的条带。我的目的蛋白140KD...

那就邪门了，怎么可能涂板子会不长呢~
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6楼2016-11-17 16:57:39
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