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wallee

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物是否可以直接酶切已有6人参与

PCR产物是否可以不回收,直接酶切

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为风思雨

铁虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-23 22:20:34
你好,可以先用酒精醋酸钠回收,去除buffer盐离子后再没切,如果是dpni这样的酶可以直接在原pcr产物里直接添加

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7楼2016-10-22 09:51:16
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W生物化工

铁虫 (初入文坛)

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感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-23 22:19:48
我们做的是先纯化,然后酶切,纯化可以去除体系中的杂质,如果不纯化可能对后续工作有不利因素
10楼2016-10-23 11:11:13
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wallee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 净莲妖圣 at 2016-10-22 08:39:04
酶切之后再胶回收啊,酶切的小片段肯定要去掉的。

嗯,酶切之后肯定要回收的。我想知道PCR之后直接酶切,PCR成分会不会影响酶的活性

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5楼2016-10-22 08:52:02
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过烟云烟

铁杆木虫 (著名写手)

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感谢参与,应助指数 +1
可以,不过回收是为了纯化产物,所以最好回收再酶切

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once you've accepted your flaws, no one can use them against you.
2楼2016-10-22 00:03:48
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wallee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 过烟云烟 at 2016-10-22 00:03:48
可以,不过回收是为了纯化产物,所以最好回收再酶切

你试过吗,效率怎么样

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3楼2016-10-22 08:36:03
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净莲妖圣

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切之后再胶回收啊,酶切的小片段肯定要去掉的。

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4楼2016-10-22 08:39:04
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过烟云烟

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-25 22:15:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by wallee at 2016-10-22 08:36:03
你试过吗,效率怎么样
...

还可以,我们实验室一直都是那么做的,pcr产物回收纯化,酶切,在回收

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once you've accepted your flaws, no one can use them against you.
6楼2016-10-22 09:20:59
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wallee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 为风思雨 at 2016-10-22 09:51:16
你好,可以先用酒精醋酸钠回收,去除buffer盐离子后再没切,如果是dpni这样的酶可以直接在原pcr产物里直接添加

好的,下次可以试一试。不知道与胶回收对比回收率如何

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8楼2016-10-22 12:54:32
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以,我试过了,效果还不错

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9楼2016-10-23 10:11:31
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