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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物是否可以直接酶切
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-23 22:20:57
PCR产物直接酶切再回收：相当于获得的量大，但纯度不高。该方法可行。
PCR产物回收再酶切：纯度高，但是获得的量少。建议用此方法。
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11楼2016-10-23 12:27:55
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小布叮咚

新虫 (小有名气)
想要实验效率高的话还是回收后再酶切，这样可以保证你的条带单一没有杂带

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happy
12楼2016-10-23 12:58:29
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-23 22:21:31
直接pcr产物最好不要直接酶切，一来可能有杂带，二来pcr体系中的离子和其他成分可能会影响酶切效率
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···
13楼2016-10-23 14:55:56
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小彬彬1991

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-23 22:21:50
建议用pcr纯化试剂盒纯化完了再酶切，首先酶切多大的量需要确定，不纯化一下测浓度就比较麻烦，第二，pcr产物有时候有杂带，直接酶切连接转化，可能会给后面的实验带来麻烦。

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实验做出来的是结果，做不出来就只是实验。
14楼2016-10-23 20:05:20
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queen3511

铜虫 (小有名气)
我们经常这么干的，效果也挺好啊，省了时间了。只是你设计引物的时候要加好酶切位点和响相应的保护碱基。只是有个不好处就是，一旦后续实验转化没做好，找原因就有点麻烦。

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15楼2016-10-24 12:42:36
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tangbowen

新虫 (小有名气)
建议回收纯化后酶切，回收用无菌水洗脱

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16楼2016-10-24 13:46:08
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
纯化，再酶切比较好

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17楼2016-10-24 13:53:10
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damaoouba

木虫 (正式写手)
最好回收一下。

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18楼2016-10-24 17:20:35
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blingstar

铜虫 (小有名气)
我们实验室一般是怎么稳妥怎样来，所以……

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为科学而献身！
19楼2016-10-25 02:25:59
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wallee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by blingstar at 2016-10-25 02:25:59
我们实验室一般是怎么稳妥怎样来，所以……

我们实验室不太用纯化，PCR也跑电泳回收……

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20楼2016-10-25 20:40:10
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