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18354255512

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建,农杆菌检测 已有1人参与

构建pcambia1302载体,单酶切,将目的片段与载体连接后,测序成功,转化到农杆菌,挑单菌落进行pcr鉴定,结果将模板换成空载质粒出现了跟我目的片段差不多大小的带,用水做对照也出现了淡淡的跟目的片段大小差不多的带,这是怎么回事呀?

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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湘苎3号

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 18354255512 at 2016-10-21 19:38:22
构建pcambia1302载体,单酶切,将目的片段与载体连接后,测序成功,转化到农杆菌,挑单菌落进行pcr鉴定,结果将模板换成空载质粒出现了跟我目的片段差不多大小的带,用水做对照也出现了淡淡的跟目的片段大小差不多的 ...

不应该是先把载体和目的片段先双酶切,再链接吗?

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3楼2016-12-09 15:56:25
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xoxo大蝴蝶

新虫 (初入文坛)

如果不是电泳液太久没换,就是引物或者水污染了,建议楼主换个新引物和水再试一下

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-10-29 23:47:46
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panzong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能片段容易扩散出来导致的。如果目的片段亮度远远大于阴性就没问题了
4楼2017-07-03 20:02:08
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