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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建，农杆菌检测
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18354255512

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建，农杆菌检测 已有1人参与

构建pcambia1302载体，单酶切，将目的片段与载体连接后，测序成功，转化到农杆菌，挑单菌落进行pcr鉴定，结果将模板换成空载质粒出现了跟我目的片段差不多大小的带，用水做对照也出现了淡淡的跟目的片段大小差不多的带，这是怎么回事呀？

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-10-21 19:38:22
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xoxo大蝴蝶

新虫 (初入文坛)
如果不是电泳液太久没换，就是引物或者水污染了，建议楼主换个新引物和水再试一下

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2楼2016-10-29 23:47:46
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湘苎3号

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 18354255512 at 2016-10-21 19:38:22
构建pcambia1302载体，单酶切，将目的片段与载体连接后，测序成功，转化到农杆菌，挑单菌落进行pcr鉴定，结果将模板换成空载质粒出现了跟我目的片段差不多大小的带，用水做对照也出现了淡淡的跟目的片段大小差不多的 ...

不应该是先把载体和目的片段先双酶切，再链接吗？

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3楼2016-12-09 15:56:25
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panzong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能片段容易扩散出来导致的。如果目的片段亮度远远大于阴性就没问题了
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4楼2017-07-03 20:02:08
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