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漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

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专业: 植物进化生物学

[交流] 农杆菌PCR检测问题已有1人参与

首先我的表达载体构建分两步：1.克隆启动子，把启动子连接到表达载体骨架上，得到一个带有特点启动子的表达载体骨架；2.克隆基因，把基因与带有特点启动子的表达载体连接好，构建得到含有启动子和基因的完整表达载体；
然后将构建好的表达载体电转农杆菌；挑菌，菌液PCR分别检测启动子和基因；
出现的问题：每次农杆菌菌液PCR检测目的基因都能检测到，但是启动子却什么都P不出来；拿构建好的表达载体做模板能检测到启动子，而且之前怀疑构建的表达载体有问题还特意测过序，测序结果表明载体没有问题；请大家帮忙解释一下为什么农杆菌菌液PCR就是检测不到启动子呢？？难道电转过程中就把启动子丢了？我总共做了七八个，不至于每个都在电转的时候把启动子丢了吧？？急求帮助，不知道有没有人遇到过同样的问题，先在此谢过了！

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