应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母诱导表达问题
51/1返回列表
查看: 2755  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

木子林夕lms

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤酵母诱导表达问题

前期我用Pme I酶线性化pPICZaA载体后进行电转SMD1168酵母菌株，挑单菌落，经特异性引物与通用引物验证后均为阳性克隆子。在YPD活化后转接到50ml BMGY中进行扩大培养，当OD600达3.0时进行菌体沉淀，移入100ml BMMY中诱导表达。但是诱导好几次都没有表达出蛋白。后面重新换了线性化位点（Sac I)，再一次构建酵母表达菌株，验证后进行诱导表达，还是表达不出蛋白。请教各位做酵母表达的前辈，帮忙分析下有可能是什么原因造成的呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2016-09-30 11:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12gxtang

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
22楼: Originally posted by 微微皮蛋 at 2018-01-25 21:29:33
楼主，问题解决了吗，我的也是pcr全是阳性，一表达就不行

除非提取酵母基因组进行PCR， 直接菌落PCR我个人感觉不是很稳定，有时候有阳性，有时候没有。目的蛋白是EGFP，菌落PCR时有时无，但是都可以观察到荧光。
赞一下 回复此楼
25楼2018-10-19 10:58:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

ttszero

新虫 (小有名气)
★
木子林夕lms(金币+1): 谢谢参与
我在ypds平板上活化，酵母比原核麻烦多了，plasmid电转要与基因组重合，不然表达不出来，还要看下酵母本身是否对甲醇敏感的

发自小木虫IOS客户端
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2016-10-02 18:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

244822104

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也在做蛋白表达，同样也是表达不出来，感觉好痛苦，也希望请教广大虫友
赞一下 回复此楼
7楼2016-10-07 12:01:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-10-10 22:42:47
1、确定你要表达的蛋白可以在酵母中表达，有相关文献报道没有？
2、你的质粒线性化后有没有电泳检测线性化的效果？
3、转化后你是直接表达没有筛选吗？我看你都是直接放大的100ml，可以一次多挑几株菌做小量表达，有表达了再放大。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2016-10-08 15:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 4/200 2026-03-23 20:48 by god_tian
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +3 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:47 by pswait
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 材料与化工考研调剂 +4 孅華 2026-03-22 4/200 2026-03-23 16:13 by 一休哥FU
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-17 10/500 2026-03-23 13:05 by 醉在风里
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭