24小时热门版块排行榜    

查看: 2781  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

木子林夕lms

新虫 (初入文坛)


[交流] 毕赤酵母诱导表达问题

前期我用Pme I酶线性化pPICZaA载体后进行电转SMD1168酵母菌株,挑单菌落,经特异性引物与通用引物验证后均为阳性克隆子。在YPD活化后转接到50ml BMGY中进行扩大培养,当OD600达3.0时进行菌体沉淀,移入100ml BMMY中诱导表达。但是诱导好几次都没有表达出蛋白。后面重新换了线性化位点(Sac I),再一次构建酵母表达菌株,验证后进行诱导表达,还是表达不出蛋白。请教各位做酵母表达的前辈,帮忙分析下有可能是什么原因造成的呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ttszero

新虫 (小有名气)



木子林夕lms(金币+1): 谢谢参与
我在ypds平板上活化,酵母比原核麻烦多了,plasmid电转要与基因组重合,不然表达不出来,还要看下酵母本身是否对甲醇敏感的

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-10-02 18:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

244822104

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也在做蛋白表达,同样也是表达不出来,感觉好痛苦,也希望请教广大虫友
7楼2016-10-07 12:01:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-10-10 22:42:47
1、确定你要表达的蛋白可以在酵母中表达,有相关文献报道没有?
2、你的质粒线性化后有没有电泳检测线性化的效果?
3、转化后你是直接表达没有筛选吗?我看你都是直接放大的100ml,可以一次多挑几株菌做小量表达,有表达了再放大。
8楼2016-10-08 15:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lemonvivi

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是发生移码突变了

发自小木虫Android客户端
9楼2016-10-09 18:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工调剂 +7 A-哆啦Z梦 2026-03-23 12/600 2026-03-23 23:16 by 星空星月
[考研] 材料专硕找调剂 +3 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:13 by peike
[考研] 070300化学求调剂 +8 苑豆豆 2026-03-20 8/400 2026-03-23 20:57 by baobaoye
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 10/500 2026-03-23 10:41 by Iveryant
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 材料工程(专)一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
信息提示
请填处理意见