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毕赤酵母真核表达型mut+和muts的鉴定
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我最近在做毕赤酵母真核表达，按照INVITROGEN表达手册进行，其中在鉴定表达型的时候，文献中说既可以用PCR方法，又可以用MMD和MMH培养基来鉴定，其中用PCR的话会同时出现两条带是快表达型，反之为慢表达型；用培养基鉴定的话在两种培养基中均良好生长，则为快表达型，在MMH培养基中生长慢或不长为慢表达型。 我两种方法都用了，首先，PCR分别用通用引物和特异性引物鉴定均只有一条带，按说明书的理论判定为慢表达型。用培养基鉴定的时候，两种培养基中都长，相对来说MMH平板上的菌落小些，所以也判定为慢表达型。但是，在后期分析表达样本的时候，发现在诱导的第12h即有表达产物，我觉得可以认为它是快表达型的。 综上，有很多疑虑，想请教各位几个问题： 1. 用PCR鉴定会出现两条带，是指用通用引物还是特异性引物？是什么原理呢？ 2. MMD/MMH培养基鉴定具体操作方法怎样的？是直接用接种环沾菌液点平板就行了吧？有什么需要特别注意的事项？说明书上说点菌于平板上的时候确保先点MMH平板然后再点MMD平板，我是这么做的。 补充：我用的载体是pPICZa，酵母细胞GS115，表达的是病毒糖蛋白。 |
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 蛋白表达纯化鉴定精华 |
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2楼2015-06-26 15:25:58
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高gaoeryang
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