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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 提取土壤微生物DNA
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陈皮柚糖

新虫 (小有名气)

[求助] 提取土壤微生物DNA 已有6人参与

要疯了，大四狗做实验做不出来，求帮助啊！！！
买了试剂盒准备提土壤微生物DNA，可是电泳并没有什么东西。连maker的条带都不清楚。做了四五次了，都这样。求大神指点迷津啊

@天使托 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-09-20 20:24:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小红帽很开心

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 陈皮柚糖 at 2016-09-21 01:12:30
怎么富集呢？
...

取浸提液在平板上涂布，根据需要的菌选择合适的培养基，真菌选择培养真菌的培养基，细菌选择培养细菌的培养基，涂布了可以在划线分离开得到单一菌的富集菌落，分别提取DNA

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4楼2016-09-21 06:09:13
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker都看不清楚，应该不完全是提取的问题。电泳方面找过原因吗？
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为什么
5楼2016-09-21 08:44:59
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sun小宏宏

铜虫 (著名写手)
你用的试剂盒是不是专门提土壤DNA的 另外一个看你电泳时操作有没有错误 有一次我把电泳槽的两极放反了就什么的没有

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11楼2016-09-24 08:33:46
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小红帽很开心 at 2016-09-21 06:09:13
取浸提液在平板上涂布，根据需要的菌选择合适的培养基，真菌选择培养真菌的培养基，细菌选择培养细菌的培养基，涂布了可以在划线分离开得到单一菌的富集菌落，分别提取DNA
...

富集后再提取，根据目的吧，细菌LB培养基！

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12楼2016-09-24 10:20:46
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wangzi4eve

新虫 (小有名气)
marker都有问题说明你配的胶或电泳液有问题，有的时候没跑出电泳来不一定没提出来，你可以直接做pcr试试，只要很少量的模板就能p目的条带。如果不是电泳的问题，那就从提取方面找原因，是不是菌加的不够，看看哪步出问题了

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13楼2016-09-24 15:13:20
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孔名卓

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
15楼2016-10-01 02:21:51
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liugs

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
16楼2016-11-02 09:38:50
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

什么富集再提，都是瞎扯，富集了还是你要的总DNA样本吗，除非你只是研究某类群的菌
考虑一下试剂盒是不是有问题，换手工提。
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帮助虫友，提升自己
17楼2016-11-02 14:43:23
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21066337

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我估计是试剂盒的问题，我这提取土壤的DNA试验了很多次，每次都成功，试剂盒要用那种提取土壤、粪便专用的，贵是贵点，但是效果好很多。我提出来的土壤总DNA的效果很好，跑胶的亮度和MAKER差不多，条带很清楚明亮，后续高通量测序完全没问题。
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18楼2016-11-02 14:55:16
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普通回帖

小红帽很开心

新虫 (小有名气)
富集一下再提取，

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2楼2016-09-20 21:09:59
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陈皮柚糖

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小红帽很开心 at 2016-09-20 21:09:59
富集一下再提取，

怎么富集呢？

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3楼2016-09-21 01:12:30
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陈皮柚糖

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小红帽很开心 at 2016-09-21 06:09:13
取浸提液在平板上涂布，根据需要的菌选择合适的培养基，真菌选择培养真菌的培养基，细菌选择培养细菌的培养基，涂布了可以在划线分离开得到单一菌的富集菌落，分别提取DNA
...

谢谢

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6楼2016-09-21 09:22:51
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陈皮柚糖

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 547star at 2016-09-21 08:44:59
marker都看不清楚，应该不完全是提取的问题。电泳方面找过原因吗？

有可能是我电泳液重复利用了好多次吧

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7楼2016-09-21 09:26:58
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star013

新虫 (知名作家)
后续做什么实验？可以交了给我们

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8楼2016-09-21 13:08:35
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美亿美生物

捐助贵宾 (职业作家)

技术服务-实验代做
严格按照试剂盒操作说明进行，然后检查土壤样本是否降解

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9楼2016-09-22 10:23:11
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陈皮柚糖

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 美亿美生物 at 2016-09-22 10:23:11
严格按照试剂盒操作说明进行，然后检查土壤样本是否降解

都是按着说明书来的，检查土壤要怎么弄，之前做过稀释涂布

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10楼2016-09-22 20:42:09
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