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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 我的酶切出来，为什么没有我的目的片段？
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Peter晓东

木虫 (正式写手)

[求助] 我的酶切出来，为什么没有我的目的片段？已有2人参与

经过三个小时的酶切，3℃，同一厂家的酶，同一buffer，最后质粒大小一样，PCR验证正确，测序正确，我想问下问题出在哪里了？
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1楼2016-08-19 19:46:43
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kyle_2016

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大多数酶的酶切温度37度，不是3度，看看酶的说明书核对下。
是双酶切还是单酶切？如是双酶切，酶共同buffer有没有用对？
如果酶和buffer都没有用错，那考虑可能是酶或者buffer有问题了，建议换新的试试。
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2楼2016-08-19 20:30:59
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yaoyaotutu

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主是不是看错了，哪有酶切的温度是3度？确保酶切的位点测序后正确，其他试剂没问题，就增加时间试试！
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不想做试验
3楼2016-08-22 11:14:27
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Peter晓东

木虫 (正式写手)
看错了，是37

发自小木虫IOS客户端
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4楼2016-08-23 08:00:26
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