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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » IPTG诱导后，采用反复冻融的方法提取出蛋白
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] IPTG诱导后，采用反复冻融的方法提取出蛋白 已有1人参与

加上样缓冲液后煮完离心，发现没有沉淀，请问这是形成了包含体没有啊？

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1楼 2016-07-27 11:14:15
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
顶

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2楼2016-07-27 11:56:10
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木蠹

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-28 08:39:07
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2楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-07-27 11:56:10
顶

亲。。。。包含体只是缠绕堆积的蛋白，加上样缓冲液煮完变性了就不沉淀了。。。。包含体存在会影响活性蛋白的提取效率，一般在蛋白提取后离心取沉淀制备电泳样本跑page检测。不过未完全破碎的细胞碎片中蛋白会影响判断，看你需要吧。

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3楼2016-07-28 04:05:07
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木蠹 at 2016-07-28 04:05:07
亲。。。。包含体只是缠绕堆积的蛋白，加上样缓冲液煮完变性了就不沉淀了。。。。包含体存在会影响活性蛋白的提取效率，一般在蛋白提取后离心取沉淀制备电泳样本跑page检测。不过未完全破碎的细胞碎片中蛋白会影响 ...

不加上样缓冲液前离心看吗

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4楼2016-07-28 07:29:39
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

加完上样液之后为什么会有沉淀呢？如果有包涵体的话，不应该是破碎完之后离心，上清是可溶性蛋白，沉淀可能为包涵体吗？你冻融之后上样，就没办法分了呀
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···
5楼2016-07-31 12:41:30
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-31 12:41:30
加完上样液之后为什么会有沉淀呢？如果有包涵体的话，不应该是破碎完之后离心，上清是可溶性蛋白，沉淀可能为包涵体吗？你冻融之后上样，就没办法分了呀

我想获得包含体中的蛋白，想要纯化，还要求纯化后蛋白有活性，应该怎么弄呀？如果用尿素溶液溶解沉淀，是不是就没有活性了呀？

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6楼2016-07-31 14:20:50
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-07-31 14:20:50
我想获得包含体中的蛋白，想要纯化，还要求纯化后蛋白有活性，应该怎么弄呀？如果用尿素溶液溶解沉淀，是不是就没有活性了呀？
...

这个就不太清楚了，我们只是检测表达体系下有没有，而且在我们这里是为了避免包涵体，没做过复性~你可以看看这两个http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=9857470&fpage=1&target=blank；http://wenku.baidu.com/link?url= ... WNne3aG-7ZZru7c8rpy
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···
7楼2016-07-31 15:14:12
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-31 15:14:12
这个就不太清楚了，我们只是检测表达体系下有没有，而且在我们这里是为了避免包涵体，没做过复性~你可以看看这两个http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=9857470&fpage=1&target=blank；http://wenk ...

多谢

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8楼2016-07-31 15:35:50
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