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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » RIPA裂解后离心提取蛋白液时出现絮状物
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jining1222

铁虫 (初入文坛)

[求助] RIPA裂解后离心提取蛋白液时出现絮状物 已有1人参与

各位，我使用CST RIPA裂解液裂解悬浮细胞，每10的6次方个细胞加20-30ul裂解液，14000g离心后时常出现絮状沉淀，无法将蛋白液顺利吸出。裂解步骤：细胞离心后加入30ul RIPA，使用移液器混匀，立即冻存于-80℃，次日或一周后取出，冰上融化，每隔十分钟 涡 旋 振 荡一次，共进行三次，之后4度14000g离心15min。请大家提出宝贵意见，问题到底出在了哪里，谢谢。
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CoffeeandTea
1楼 2016-07-18 16:47:23
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)
比较粘稠可能是核酸释放出来了，可以超声、加核酸酶或直接煮沸变性

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5楼2016-07-21 10:00:49
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jining1222: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-07-18 18:19:12
只是用RIPA裂解么？出现絮状沉淀可能是脂蛋白吧，裂解完了之后建议以超声波进行破碎，超声破碎后再离心，这样也许会好些。
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2楼2016-07-18 17:43:02
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jining1222

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 水逝雁南飞 at 2016-07-18 17:43:02
只是用RIPA裂解么？出现絮状沉淀可能是脂蛋白吧，裂解完了之后建议以超声波进行破碎，超声破碎后再离心，这样也许会好些。

谢谢
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CoffeeandTea
3楼2016-07-18 18:19:22
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baobaoliang

铜虫 (初入文坛)
应该裂解液量少了

发自小木虫Android客户端
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4楼2016-07-19 22:53:01
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