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青春的老鸭

新虫 (初入文坛)

[交流] 如何从动物组织中提取蛋白? 已有1人参与

我现在打算用RIPA裂解液提取小鼠肠蛋白,方法如下:
①先称取50mg组织,用液氮充分研磨
②每份样品中加入500ul 混合工作液(RIPA裂解液:PMSF=100:1)充分震荡
③离心机13000rpm/min离心10分钟,后取上清液分装于-80℃保存。

想问各位大神:1、这个操作流程可行吗?
                         2、吧里有人说组织提蛋白的话要加cocktail蛋白酶抑制剂,是这样吗?如果要加,浓度和添加量分别是多少?

本人第一次提蛋白,望各位大神分享下宝贵经验,谢谢。
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白酶抑制剂是要加的,抑制蛋白的降解,cocatail,氟化钠,焦磷酸钠,钒酸钠,这个你可以在网上查一下具体的浓度,配好母液,用的时候加到RIPA里面。
我们没有用研磨,我们使用的匀浆仪所以前面不太一样,不过那样操作应该是没有问题的。
最后的离心我们用12000,不过13000应该也没有问题。上清还要测浓度,用5*SDS LB稀释,最后跑胶,你要是不拿来跑胶就无所谓了。
2楼2015-08-10 12:21:46
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