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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 如何从动物组织中提取蛋白？
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青春的老鸭

新虫 (初入文坛)

[交流] 如何从动物组织中提取蛋白？ 已有1人参与

我现在打算用RIPA裂解液提取小鼠肠蛋白，方法如下：
①先称取50mg组织，用液氮充分研磨
②每份样品中加入500ul 混合工作液（RIPA裂解液：PMSF=100:1）充分震荡
③离心机13000rpm/min离心10分钟，后取上清液分装于-80℃保存。

想问各位大神：1、这个操作流程可行吗？
                         2、吧里有人说组织提蛋白的话要加cocktail蛋白酶抑制剂，是这样吗？如果要加，浓度和添加量分别是多少？

本人第一次提蛋白，望各位大神分享下宝贵经验，谢谢。
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1楼 2015-08-10 11:43:26
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lcuwxy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蛋白酶抑制剂是要加的，抑制蛋白的降解，cocatail，氟化钠，焦磷酸钠，钒酸钠，这个你可以在网上查一下具体的浓度，配好母液，用的时候加到RIPA里面。
我们没有用研磨，我们使用的匀浆仪所以前面不太一样，不过那样操作应该是没有问题的。
最后的离心我们用12000，不过13000应该也没有问题。上清还要测浓度，用5*SDS LB稀释，最后跑胶，你要是不拿来跑胶就无所谓了。
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2楼2015-08-10 12:21:46
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