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冻存的肝组织,提蛋白加裂解液之前,放在冰上5分钟,会不会使磷酸化蛋白去磷酸化?
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如题,提取小鼠肝脏组织的总蛋白,目的是做磷酸化蛋白的western blot. 从-80度冰箱取出样品后放在液氮中,将样品取出约50 mg于预冷的离心管中后,再扔入液氮中。 去配RIPA裂解液的时候,师弟将液氮中的样品全部取出插在了冰上,我回来的时候,感觉样品中的液氮已经挥发光了,赶紧加入了蛋白裂解液(里面有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂),这个过程大约有五六分钟。 加裂解前,样品在冰上的这段时间,会使肝组织中的磷酸化蛋白去磷酸化吗? 希望有经验的前辈多多指导,感谢! |
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