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jining1222

铁虫 (初入文坛)

[求助] RIPA裂解后离心提取蛋白液时出现絮状物已有1人参与

各位,我使用CST RIPA裂解液裂解悬浮细胞,每10的6次方个细胞加20-30ul裂解液,14000g离心后时常出现絮状沉淀,无法将蛋白液顺利吸出。裂解步骤:细胞离心后加入30ul RIPA,使用移液器混匀,立即冻存于-80℃,次日或一周后取出,冰上融化,每隔十分钟 涡 旋 振 荡一次,共进行三次,之后4度14000g离心15min。请大家提出宝贵意见,问题到底出在了哪里,谢谢。
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CoffeeandTea
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水逝雁南飞

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jining1222: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-07-18 18:19:12
只是用RIPA裂解么?出现絮状沉淀可能是脂蛋白吧,裂解完了之后建议以超声波进行破碎,超声破碎后再离心,这样也许会好些。
2楼2016-07-18 17:43:02
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jining1222

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 水逝雁南飞 at 2016-07-18 17:43:02
只是用RIPA裂解么?出现絮状沉淀可能是脂蛋白吧,裂解完了之后建议以超声波进行破碎,超声破碎后再离心,这样也许会好些。

谢谢
CoffeeandTea
3楼2016-07-18 18:19:22
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baobaoliang

铜虫 (初入文坛)

4楼2016-07-19 22:53:01
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

比较粘稠可能是核酸释放出来了,可以超声、加核酸酶或直接煮沸变性

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-07-21 10:00:49
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柳梢月

金虫 (小有名气)

加完裂解液裂解完后,可以用1ML注射器反复吹打,这是会有很多泡泡,然后12000转每分钟离心30分钟,你再看就会发现没有絮状物啦,另外10的6次方细胞可以考虑把裂解液加到50微升

发自小木虫Android客户端
6楼2016-07-24 21:23:12
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