| 查看: 8128 | 回复: 5 | ||
[求助]
RIPA裂解后离心提取蛋白液时出现絮状物 已有1人参与
|
| 各位，我使用CST RIPA裂解液裂解悬浮细胞，每10的6次方个细胞加20-30ul裂解液，14000g离心后时常出现絮状沉淀，无法将蛋白液顺利吸出。裂解步骤：细胞离心后加入30ul RIPA，使用移液器混匀，立即冻存于-80℃，次日或一周后取出，冰上融化，每隔十分钟 涡 旋 振 荡一次，共进行三次，之后4度14000g离心15min。请大家提出宝贵意见，问题到底出在了哪里，谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
假如你的研究生提出不合理要求
已经有4人回复
-
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有27人回复
-
所感
已经有3人回复
-
要不要辞职读博？
已经有7人回复
-
不自信的我
已经有11人回复
-
北核录用
已经有3人回复
-
实验室接单子
已经有3人回复
-
磺酰氟产物，毕不了业了！
已经有8人回复
-
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？
已经有10人回复
-
26申博（荧光探针方向，有机合成）
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 巨噬细胞RAW264.7细胞提取蛋白浓度低，该怎么办
已经有4人回复
- 如何从动物组织中提取蛋白？
已经有1人回复
- 冻存的肝组织，提蛋白加裂解液之前，放在冰上5分钟，会不会使磷酸化蛋白去磷酸化？
已经有0人回复
- 提蛋白遇到瓶颈了，实验没法继续，各位大侠帮帮忙，一起找一下原因，有考染和银染图
已经有3人回复
- RIPA提取总蛋白浓度低的原因
已经有2人回复
- 关于western相关试剂材料的选择（转）
已经有7人回复
2楼2016-07-18 17:43:02
3楼2016-07-18 18:19:22
baobaoliang
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 234.5
- 红花: 1
- 帖子: 13
- 在线: 8.3小时
- 虫号: 3655604
- 注册: 2015-01-21
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
4楼2016-07-19 22:53:01
berniehuang
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 4381.8
- 红花: 3
- 帖子: 303
- 在线: 782.2小时
- 虫号: 1073350
- 注册: 2010-08-12
- 专业: 免疫生物学
5楼2016-07-21 10:00:49
柳梢月
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3508.9
- 散金: 60
- 红花: 2
- 帖子: 99
- 在线: 214.2小时
- 虫号: 2126620
- 注册: 2012-11-14
- 专业: 有机合成
|
加完裂解液裂解完后，可以用1ML注射器反复吹打，这是会有很多泡泡，然后12000转每分钟离心30分钟，你再看就会发现没有絮状物啦，另外10的6次方细胞可以考虑把裂解液加到50微升 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-07-24 21:23:12