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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T-A克隆，连接目的片段后，扩出来的不是目的基因大小，怎么回事
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18716248350

新虫 (小有名气)

[求助] T-A克隆，连接目的片段后，扩出来的不是目的基因大小，怎么回事 已有2人参与

用pMD19T载体连接用天根taqmix酶扩出来的目的基因连接，菌液PCR用M13F/R为引物扩出来的片段不是我目的基因片段大小，做了几遍了还是这样，怎么回事？（我的目的基因1300bp左右，扩出来的片段750bp左右)，图片中1孔为2000maker,2-10孔为挑的九个菌落P出来的，最后一个为我的胶回收的目的基因片段。

T-A克隆，连接目的片段后，扩出来的不是目的基因大小，怎么回事
2016.5.8,M13F和R扩增的CHRA2,最后一孔chrA2切胶回收.jpg
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1楼 2016-06-04 19:53:04
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clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 建议不错，希望可以继续支持各位虫友 2016-06-09 18:46:54
你的目的基因里有没有M13F或M13R对应的结合位点？如果有的话，有可能P出来750 bp的片段。
另外，你可以提质粒，用载体上的酶切位点做酶切，看看大小对不对。
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2楼2016-06-07 04:32:21
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by clark2010 at 2016-06-07 04:32:21
你的目的基因里有没有M13F或M13R对应的结合位点？如果有的话，有可能P出来750 bp的片段。
另外，你可以提质粒，用载体上的酶切位点做酶切，看看大小对不对。

这个有没有结合位点我还没注意唉，我看看，我看没P出来正确条带，就没做下一步酶切了，明天试试

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3楼2016-06-07 23:44:08
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風之叶落

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-17 21:53:57
我们实验室也有人遇见同样的问题 但是重新P基因然后连接转化就没问题了
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4楼2016-06-17 18:32:00
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masterboyama

铁虫 (著名写手)
用m13前引物加上目标基因后引物扩一下看看大小。

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5楼2016-06-17 19:32:06
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