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18716248350

新虫 (小有名气)

[求助] T-A克隆,连接目的片段后,扩出来的不是目的基因大小,怎么回事 已有2人参与

用pMD19T载体连接用天根taqmix酶扩出来的目的基因连接,菌液PCR用M13F/R为引物扩出来的片段不是我目的基因片段大小,做了几遍了还是这样,怎么回事?(我的目的基因1300bp左右,扩出来的片段750bp左右),图片中1孔为2000maker,2-10孔为挑的九个菌落P出来的,最后一个为我的胶回收的目的基因片段。

T-A克隆,连接目的片段后,扩出来的不是目的基因大小,怎么回事
2016.5.8,M13F和R扩增的CHRA2,最后一孔chrA2切胶回收.jpg
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clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 建议不错,希望可以继续支持各位虫友 2016-06-09 18:46:54
你的目的基因里有没有M13F或M13R对应的结合位点?如果有的话,有可能P出来750 bp的片段。
另外,你可以提质粒,用载体上的酶切位点做酶切,看看大小对不对。
2楼2016-06-07 04:32:21
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18716248350

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by clark2010 at 2016-06-07 04:32:21
你的目的基因里有没有M13F或M13R对应的结合位点?如果有的话,有可能P出来750 bp的片段。
另外,你可以提质粒,用载体上的酶切位点做酶切,看看大小对不对。

这个有没有结合位点我还没注意唉,我看看,我看没P出来正确条带,就没做下一步酶切了,明天试试

发自小木虫Android客户端
3楼2016-06-07 23:44:08
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風之叶落

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-17 21:53:57
我们实验室也有人遇见同样的问题 但是重新P基因然后连接转化就没问题了
4楼2016-06-17 18:32:00
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masterboyama

铁虫 (著名写手)

用m13前引物加上目标基因后引物扩一下看看大小。

发自小木虫Android客户端
5楼2016-06-17 19:32:06
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