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YXS-YM

银虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌超声破碎 已有2人参与

各位前辈,请问BL21细胞超声破碎参数应该怎么设置啊?假如我用200ml培养基,菌体沉淀是1.0g,应该加入多少缓冲液重悬?谢谢了!

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YXS-YM

银虫 (初入文坛)

5楼2016-06-01 13:19:18
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fishlxx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
您好,按照我的经验:
1g菌体加入5-7mL裂解液将菌体重悬,再加入终浓度1mM的DTT和0.2mLPMSF,全程低温操作,破碎条件为:超声破碎仪功率1000W,工作时间8s,间歇50s,循环次数20次左右。
具体循环次数最好自己摸一下,可以用1mL移液器吸起破碎液并快速打出,破碎液呈均一水样液体即为破碎完全,过度破碎会损伤蛋白。
2楼2016-05-30 16:50:30
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

我的200毫升培养液得到1克湿重菌体,加5毫升裂解缓冲液,重悬,加溶菌酶冰上静置15分钟。冰浴400w超声破碎,工作三秒,间隔五秒,至缓冲液清澈透亮。过滤膜,过柱

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3楼2016-05-31 00:47:52
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要想降低沉淀,最好悬液量大,建议10毫升以上,冰上超声,间断进行。
4楼2016-06-01 05:28:24
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