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银虫 (初入文坛)

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[求助] 大肠杆菌超声破碎已有2人参与

各位前辈，请问BL21细胞超声破碎参数应该怎么设置啊？假如我用200ml培养基，菌体沉淀是1.0g，应该加入多少缓冲液重悬？谢谢了！

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1楼 2016-05-29 16:28:42

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fishlxx

新虫 (初入文坛)

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虫号: 4225470
注册: 2015-11-17
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

您好，按照我的经验：
1g菌体加入5-7mL裂解液将菌体重悬，再加入终浓度1mM的DTT和0.2mLPMSF，全程低温操作，破碎条件为：超声破碎仪功率1000W，工作时间8s，间歇50s，循环次数20次左右。
具体循环次数最好自己摸一下，可以用1mL移液器吸起破碎液并快速打出，破碎液呈均一水样液体即为破碎完全，过度破碎会损伤蛋白。