24小时热门版块排行榜    

查看: 2430  |  回复: 5

YXS-YM

银虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌超声破碎 已有2人参与

各位前辈,请问BL21细胞超声破碎参数应该怎么设置啊?假如我用200ml培养基,菌体沉淀是1.0g,应该加入多少缓冲液重悬?谢谢了!

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fishlxx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
您好,按照我的经验:
1g菌体加入5-7mL裂解液将菌体重悬,再加入终浓度1mM的DTT和0.2mLPMSF,全程低温操作,破碎条件为:超声破碎仪功率1000W,工作时间8s,间歇50s,循环次数20次左右。
具体循环次数最好自己摸一下,可以用1mL移液器吸起破碎液并快速打出,破碎液呈均一水样液体即为破碎完全,过度破碎会损伤蛋白。
2楼2016-05-30 16:50:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

我的200毫升培养液得到1克湿重菌体,加5毫升裂解缓冲液,重悬,加溶菌酶冰上静置15分钟。冰浴400w超声破碎,工作三秒,间隔五秒,至缓冲液清澈透亮。过滤膜,过柱

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-31 00:47:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要想降低沉淀,最好悬液量大,建议10毫升以上,冰上超声,间断进行。
4楼2016-06-01 05:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YXS-YM

银虫 (初入文坛)

5楼2016-06-01 13:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

6楼2016-06-01 18:41:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 YXS-YM 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜吗? +12 布布和一二 2026-08-19 12/600 2026-08-19 13:45 by gloomy6159
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +8 ziyangfang 2026-08-19 9/450 2026-08-19 13:08 by blacksandy
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +8 kkkl_v 2026-08-19 8/400 2026-08-19 12:34 by Vivilian
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +52 医学老男孩 2026-08-13 115/5750 2026-08-19 12:09 by 医学老男孩
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +10 基诺咪客 2026-08-17 14/700 2026-08-19 10:34 by 基诺咪客
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +4 Tide man 2026-08-12 5/250 2026-08-19 07:41 by 201120518022
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见