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lynn111666铜虫 (初入文坛)
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RT后的cDNA可以稀释吗？ 已有1人参与
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最近做RT-PCR，但是用Takara的RR047A做RT后得到的cDNA（共20μL），如果按Takara的RR420A做PCR的话，cDNA完全不够(20μL的PCR体系，加2μLcDNA)。 那可以先把得到的cDNA先稀释下，少加点吗？ 能把20μL的PCR体系改成10μL的吗？ PCR试剂盒中的ROX可以不加吗？（PCR仪器：stepone plus） 谢谢！  |
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2楼2016-05-17 00:35:15
atlanticwi
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............................. cDNA从来都是要稀释用的！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！ cDNA从来都是要稀释用的！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！ cDNA从来都是要稀释用的！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！ 只要你的起始量RNA按实验说明书来做（20 uL体系 1~10ug RNA） 但这不是重点！ 重点是，RT后的cDNA含有众多杂质（反转录酶 buffer dNTPs Oligo等）这些对下游的PCR都是不利的。 所以需要稀释使用，做基因克隆，半定量我们一般稀释10~20倍 定量虽然不稀释，但是加的极少，一个孔加0.02ul 理论上做一次20ul体系的cDNA够你做很多很多很多很多很多很多很多很多很多实验的。 |
3楼2016-05-17 09:43:52
yspflyfuture
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