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小研来报到

金虫 (小有名气)

[求助] 小蛋白电泳的问题 已有2人参与

我的目的蛋白大概在14KD,用SDS—PAGE电泳(15%的分离胶),蛋白marker(从大到小分别是97.2KD、66.4、44.3、29、20.1、14.3KD),蛋白诱导表达时目的蛋白带了一段,大概18KD,在图中第4、8道大概18KD的位置上有,但是到了下面蛋白就有点糊,也不好鉴定,请问有什么好的解决办法吗?是继续提高分离胶的浓度吗?老师就叫我找跑小蛋白的Tricine—SDS—PAGE电泳,实验室只有SDS—PAGE电泳仪器和试剂,Tricine—SDS—PAGE电泳的仪器装置是和SDS—PAGE电泳仪器装置一样吗?谢谢!

小蛋白电泳的问题
P60511-10001611.jpg@gyesang@hc-material
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laolun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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减少上样量,电压第一点,跑慢点。
2楼2016-05-16 12:15:56
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rjq0827

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
浓缩胶电压低一点,分离胶在稍微高一点,还有两个用的装置是一样的,只是系统不同
4楼2016-05-17 16:15:51
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

tricine电泳就是溶液配置不一样,设备都是一样的!

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I am not a hero , but I served with heroes!
7楼2016-05-20 06:35:15
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)

10楼2016-11-21 20:53:42
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普通回帖

沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

一样的,就是配胶的体系不一样,Tricine很贵的。最好买试剂盒。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-17 15:12:11
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小研来报到

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by rjq0827 at 2016-05-17 16:15:51
浓缩胶电压低一点,分离胶在稍微高一点,还有两个用的装置是一样的,只是系统不同

浓缩胶跑的电压是多少,跑多久?分离胶的电压用多少,又跑多久呢?请
不吝赐教

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5楼2016-05-17 19:35:40
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博学善思

新虫 (小有名气)

建议换个marker,你的目的蛋白都不在marker范围内,不好观察。我们积层胶一直用电压80V,到了分离胶120V

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新浪微博:博学善思work
6楼2016-05-19 00:09:41
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15895812751

新虫 (初入文坛)

8楼2016-05-20 18:03:16
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李勋111

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wlt728 at 2016-05-20 06:35:15
tricine电泳就是溶液配置不一样,设备都是一样的!

请问下Tricine-SDS-PAGE阴极和阳极缓冲液怎么加啊?
9楼2016-11-20 21:22:38
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