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fxianmin

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白电泳 已有3人参与

做的是磷酸化蛋白样,样品没有除去离子(没透析),Marker道还可以。不知是不是蛋白样太浓了或是样品中杂质离子太多。
问题
1.目的蛋白从头到尾拖带,没有条带,在浓缩胶内下不来
2.第二道的原样蛋白最下面有大的块状物,不是条带
3.目的蛋白是热聚合乳清蛋白和磷酸-乳清蛋白热共聚物
4.分离胶为12%,浓缩胶为5%
5.还想问问,乳清蛋白是低分子量的,主要成分在20KD下,聚合后不知多少?胶是不是浓度低了?胶浓度高了,大分子的蛋白跑不出来,分不开,胶浓度低了,小分子的蛋白会不会跑出去?
谢谢了!

蛋白电泳
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慌慌张张,匆匆忙忙,为何生活总是这样?不卑不亢,不慌不忙,也许生活应该这样!
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544534326

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的marker带还能看的清楚,说明你的胶的问题不大,但样品带却没有条带或条带很粗,原因要么是你的样品中离子浓度太大,或者样品没有浓缩好。你自己在好好看看吧
人活着就要保持一种劳作的状态!
2楼2014-03-17 08:19:41
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
个人观点 第二道的块状有可能是蛋白浓度过高造成的 可以稀释跑一下
第三道没下来 可能是蛋白分子量过大或者你的样品出现沉淀
所以建议跑下分子排阻看看 分子量
太胖了!~
3楼2014-03-17 08:42:55
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454277617

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我认为也是蛋白样浓度太高了,导致条带模糊。可以稀释一下。并且样液最好再过滤一下 除去不溶性物质。
4楼2014-03-18 13:55:14
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