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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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唯念念念

新虫 (初入文坛)

[求助] 克隆启动子,用之前的退火温度怎么也跑不出条带?谢谢回答,急,急,急 已有2人参与

克隆启动子,之前已经跑出了条带,因为条带不是很好,因为要用图片,所以就想重新跑。过了几天做的,没有换模板DNA的品种,还是用原来的退火温度,只是重新提了一下DNA,新提的DNA测od值还可以,已经提过三次了,都跑不出条带。担心是不是把温度退火温度记错了,又重新跑的梯度,还是没有出来。本科生一个,马上要毕业了,所以很着急,谢谢啦

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA模板量的问题吧。
2楼2016-05-09 00:49:46
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唯念念念

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 00:49:46
DNA模板量的问题吧。

已经提过三次DNA了,OD值还可以

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3楼2016-05-09 08:55:10
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 唯念念念 at 2016-05-09 08:55:10
已经提过三次DNA了,OD值还可以
...

我说的是PCR体系中加入模板DNA的量。可能两次加的体积一样,但你两次提取的浓度不同,所以模板量不同。
如果只是想跑个好点的图,可以用你之前已有的产物或克隆做模板,肯定会出条带。
4楼2016-05-09 12:05:02
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唯念念念

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 12:05:02
我说的是PCR体系中加入模板DNA的量。可能两次加的体积一样,但你两次提取的浓度不同,所以模板量不同。
如果只是想跑个好点的图,可以用你之前已有的产物或克隆做模板,肯定会出条带。...

好的,谢谢

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5楼2016-05-18 20:31:24
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里四sei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用词一次的PCR产物做模版,做第二次PCR
6楼2016-09-01 16:30:04
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