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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆启动子，用之前的退火温度怎么也跑不出条带？谢谢回答，急，急，急
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唯念念念

新虫 (初入文坛)

[求助] 克隆启动子，用之前的退火温度怎么也跑不出条带？谢谢回答，急，急，急 已有2人参与

克隆启动子，之前已经跑出了条带，因为条带不是很好，因为要用图片，所以就想重新跑。过了几天做的，没有换模板DNA的品种，还是用原来的退火温度，只是重新提了一下DNA，新提的DNA测od值还可以，已经提过三次了，都跑不出条带。担心是不是把温度退火温度记错了，又重新跑的梯度，还是没有出来。本科生一个，马上要毕业了，所以很着急，谢谢啦

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-05-08 18:27:20
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA模板量的问题吧。
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2楼2016-05-09 00:49:46
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 00:49:46
DNA模板量的问题吧。

已经提过三次DNA了，OD值还可以

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3楼2016-05-09 08:55:10
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 唯念念念 at 2016-05-09 08:55:10
已经提过三次DNA了，OD值还可以
...

我说的是PCR体系中加入模板DNA的量。可能两次加的体积一样，但你两次提取的浓度不同，所以模板量不同。
如果只是想跑个好点的图，可以用你之前已有的产物或克隆做模板，肯定会出条带。
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4楼2016-05-09 12:05:02
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 12:05:02
我说的是PCR体系中加入模板DNA的量。可能两次加的体积一样，但你两次提取的浓度不同，所以模板量不同。
如果只是想跑个好点的图，可以用你之前已有的产物或克隆做模板，肯定会出条带。...

好的，谢谢

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5楼2016-05-18 20:31:24
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里四sei

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

用词一次的PCR产物做模版，做第二次PCR
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6楼2016-09-01 16:30:04
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