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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA提取之后琼脂糖电泳发现条带很暗这是什么原因？
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清草XC

金虫 (正式写手)

[交流] RNA提取之后琼脂糖电泳发现条带很暗这是什么原因？

如题所示，跑出来的条带如图所示：请各位大神帮忙解析，谢谢啦

RNA提取之后琼脂糖电泳发现条带很暗这是什么原因？
2016-4-24.jpg
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1楼 2016-05-05 12:45:06
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★ ★
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清草XC: 金币+3 2016-05-05 18:04:14
.................嗯

1) 聚焦不清
2) 亮暗和浓度有关，觉得暗就提高曝光程度
3) RNA电泳看的是三条带之间的比对也就是完整性，非要比分子量上的也是RNA Marker而不是DNA Marker

个人看法，有问题请指正
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Let God do with it as He wills
2楼2016-05-05 13:05:50
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清草XC

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-05 13:05:50
.................嗯

1) 聚焦不清
2) 亮暗和浓度有关，觉得暗就提高曝光程度
3) RNA电泳看的是三条带之间的比对也就是完整性，非要比分子量上的也是RNA Marker而不是DNA Marker

个人看法，有问题请指正

非常感谢！同样的条件有的提的浓度高有的低，实验过程都一样，真不知道问题出现在哪里了
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3楼2016-05-05 18:04:01
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z631535213

木虫 (正式写手)
★
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mark，等楼主问题解决。之前我也碰到过这个问题，当时初步考虑应该是PCR过程中某因素造成的

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4楼2016-05-05 20:26:17
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
★
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是不是拍照的时候亮度没调好

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5楼2016-05-05 23:48:15
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jackyoung

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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清草XC: 金币+3 2016-06-06 10:35:20
没有啥问题，RNA是单链，与小沟结合染料结合能力逊于DNA，所以同等条件下亮度会弱。看你的胶图，28S 18S rRNA条带完整清晰，完整性没有问题。图上有两条特别暗的区域，应该是指示剂造成的，loading buffer可以少加一些。

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CestLaVie
6楼2016-05-09 23:47:32
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清草XC

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-09 23:47:32
没有啥问题，RNA是单链，与小沟结合染料结合能力逊于DNA，所以同等条件下亮度会弱。看你的胶图，28S 18S rRNA条带完整清晰，完整性没有问题。图上有两条特别暗的区域，应该是指示剂造成的，loading buffer可以少加一 ...

可是我们测出来的RNA的含量很低，这是什么原因呢，从5×106细胞中提取RNA，一般能获得多少ug的RNA呢？
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7楼2016-06-06 10:37:33
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jackyoung

新虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by 清草XC at 2016-06-06 10:37:33
可是我们测出来的RNA的含量很低，这是什么原因呢，从5×106细胞中提取RNA，一般能获得多少ug的RNA呢？...

测定的时候智能一点儿的分光光度计都会去除本底，然后再按公式换算，这就造成了有杂质污染的样品测定不准确（这种污染不一定能反映在电泳图上），所以要综合采用多种手段看结果。

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CestLaVie
8楼2016-06-06 22:48:02
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