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清草XC

金虫 (正式写手)

[交流] RNA提取之后琼脂糖电泳发现条带很暗这是什么原因?

如题所示,跑出来的条带如图所示:请各位大神帮忙解析,谢谢啦

RNA提取之后琼脂糖电泳发现条带很暗这是什么原因?
2016-4-24.jpg
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
清草XC: 金币+3 2016-05-05 18:04:14
.................嗯

1) 聚焦不清
2) 亮暗和浓度有关,觉得暗就提高曝光程度
3) RNA电泳看的是三条带之间的比对也就是完整性,非要比分子量上的也是RNA Marker而不是DNA Marker

个人看法,有问题请指正
Let God do with it as He wills
2楼2016-05-05 13:05:50
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清草XC

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-05 13:05:50
.................嗯

1) 聚焦不清
2) 亮暗和浓度有关,觉得暗就提高曝光程度
3) RNA电泳看的是三条带之间的比对也就是完整性,非要比分子量上的也是RNA Marker而不是DNA Marker

个人看法,有问题请指正

非常感谢!同样的条件有的提的浓度高有的低,实验过程都一样,真不知道问题出现在哪里了
3楼2016-05-05 18:04:01
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z631535213

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
mark,等楼主问题解决。之前我也碰到过这个问题,当时初步考虑应该是PCR过程中某因素造成的

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-05-05 20:26:17
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是拍照的时候亮度没调好

发自小木虫Android客户端
5楼2016-05-05 23:48:15
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jackyoung

新虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
清草XC: 金币+3 2016-06-06 10:35:20
没有啥问题,RNA是单链,与小沟结合染料结合能力逊于DNA,所以同等条件下亮度会弱。看你的胶图,28S 18S rRNA条带完整清晰,完整性没有问题。图上有两条特别暗的区域,应该是指示剂造成的,loading buffer可以少加一些。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
6楼2016-05-09 23:47:32
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清草XC

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-09 23:47:32
没有啥问题,RNA是单链,与小沟结合染料结合能力逊于DNA,所以同等条件下亮度会弱。看你的胶图,28S 18S rRNA条带完整清晰,完整性没有问题。图上有两条特别暗的区域,应该是指示剂造成的,loading buffer可以少加一 ...

可是我们测出来的RNA的含量很低,这是什么原因呢,从5×106细胞中提取RNA,一般能获得多少ug的RNA呢?
7楼2016-06-06 10:37:33
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jackyoung

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 清草XC at 2016-06-06 10:37:33
可是我们测出来的RNA的含量很低,这是什么原因呢,从5×106细胞中提取RNA,一般能获得多少ug的RNA呢?...

测定的时候智能一点儿的分光光度计都会去除本底,然后再按公式换算,这就造成了有杂质污染的样品测定不准确(这种污染不一定能反映在电泳图上),所以要综合采用多种手段看结果。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
8楼2016-06-06 22:48:02
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