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青青花草香

新虫 (初入文坛)

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专业: 植物生理与生化

[求助] 关于Ct值的问题已有2人参与

请问各位大神，检测引物的时候RT-PCR是单峰，但是却没有Ct值是什么原因？

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1楼 2016-05-05 12:00:21

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)

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专业: 园艺学与植物营养学

引用回帖:

2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-05 13:09:28
....................嗯

Ct和Melt Curve没有关系，单看amp plot就知道要不是模板量太低，就是扩增失败，如果你引物设计的差，全是引物二聚体，P不出任何东西，也能跑出来很漂亮的单峰

绝逼引物二聚体或非特异括增，tm还不到80，肯定是在逗我。先做普通PCR加跑胶确定好了条件再上。
这种情况下很难出15-30之间的Ct，即使出了也不是你要研究的东西。

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