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夏小米1202

银虫 (初入文坛)

[求助] 大鼠血浆预处理的问题 已有4人参与

大鼠血浆用的是1:4的甲醇除蛋白,40°C下减压干燥浓缩,用初始流动相复溶。跑出来的液相图前面几分钟峰很高(类似下图),而后面我的东西基本没有,求问这是什么原因?是因为我的物质在沉淀蛋白的时候损失了很多呢?还是减压干燥步骤中热不稳定?我做的是中药复方的代谢组学方向,所以要提出大部分的物质,用液液萃取的话提取的化合物有限。液相柱子是安捷伦 Zorbax C18,流动相是0.5%的甲酸和乙腈梯度洗脱。第一次发帖求助,请多多关照~

大鼠血浆预处理的问题
PICTURE.png
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夏小米1202

银虫 (初入文坛)

没有人比较懂的嚒
真的困扰了好久没做出来
2楼2016-04-18 15:57:53
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清凉__小吊带

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
夏小米1202: 金币+20, 有帮助 2016-04-21 11:15:01
我们都用氮气流或者空气流吹干,没用过减压干燥。

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3楼2016-04-18 19:44:44
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kevinrowe

金虫 (著名写手)

生物样本中一般待测物含量是比较低的,你是不是考虑一下给药量的问题,还有取血时间点的问题,还有复溶溶剂和体积的问题。

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4楼2016-04-18 19:47:28
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xiyingliai

新虫 (著名写手)

首先要弄清你的目标成分的水溶性,如果水溶性很强,要远亲水柱才能把保留时间往后拖,避开基质干扰

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5楼2016-04-19 00:03:33
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yujun1214

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
夏小米1202: 金币+20, 有帮助 2016-04-21 11:18:39
血浆的话,液相前4分钟都是杂质峰,可能你的样品峰和杂质峰重合了,建议更改流动相,使样品峰在5分钟以后,如果你的分析物,处理过程中损失很大的话,你后面的回收率也是问题,如果是水溶性的或者苷类,建议氮气水浴温度降到35左右或者30,温度稍高对血浆中这类物质降解特别明显,虽然会损耗很多氮气。

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6楼2016-04-20 20:23:27
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飝灬畱曐

木虫 (正式写手)

你没有做方法学考察吗?

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7楼2016-04-20 20:37:59
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飝灬畱曐

木虫 (正式写手)

除蛋白的方法是需要验证的,如果提取率回收率等都是考察指标的

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8楼2016-04-20 20:39:20
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夏小米1202

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 清凉__小吊带 at 2016-04-18 19:44:44
我们都用氮气流或者空气流吹干,没用过减压干燥。

好的,谢谢!准备借一下氮吹仪试一下
9楼2016-04-21 10:17:08
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夏小米1202

银虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by kevinrowe at 2016-04-18 19:47:28
生物样本中一般待测物含量是比较低的,你是不是考虑一下给药量的问题,还有取血时间点的问题,还有复溶溶剂和体积的问题。

给药量是按人的等效剂量换算的,取血时间是5 min静脉注射的,复溶体积只有100μL,98%的水相和2%的有机相,现在一想,是有可能水相比例太高的缘故?
10楼2016-04-21 11:11:50
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