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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 求助 质粒诱导原核表达总是不成功！
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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 质粒诱导原核表达总是不成功！ 已有2人参与

我把已经构建好的载体转入BL21感受态里后，加入IPTG诱导原核表达，然后跑PAGE发现 无论上清还是包含体內都没有想要的蛋白。
目前鉴定过转入BL21后挑单克隆的菌液，是正确的。也看过测序结果，并没有移码，不知道怎么办了，求教大神！！毕业困难

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1楼 2016-03-27 15:15:25
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zhyk615

木虫 (小有名气)
我的也是，目前纠结

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DODODO！
2楼2016-03-29 09:01:24
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)
包含体？杆菌两头的那个结构吧？

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3楼2016-03-29 16:04:43
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是翻译出问题了
1）RBS还有吗？
2）密码子优化了吗？
3）mRNA的二级结构分析过吗？
4）其他
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我笃信:人定胜天！
4楼2016-03-29 16:16:28
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小小细胞啊

新虫 (小有名气)
师姐们说有的蛋白有可能就是不表达

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5楼2016-03-29 19:55:56
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MarchZR

银虫 (小有名气)
这个原因有很多种，我也不想一一分析了，说到底还是经验不足啊！但是结果就是蛋白不表达：建议参考资料：原核不表达或表达为什么不在上清：7点几兆的，有点大http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html
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6楼2016-03-30 10:19:10
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7墨冥7

新虫 (初入文坛)
我现在的蛋白也诱导不出来了，而且想不明白原因，几个月前诱导的好好的，这次重新诱导就什么都没有了，哭死
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7楼2016-03-30 14:49:39
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
如果前期的工作都正确。考虑一下载体的插入位置，是否能正常转录（有这种情况，标记基因表达了，而目的基因沉默）

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8楼2016-03-31 23:33:15
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elric

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以尝试下让另一个人帮你从构建好的载体做起，重新转细菌，做诱导表达，低温试试
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9楼2016-04-01 02:38:28
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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by elric at 2016-04-01 02:38:28
可以尝试下让另一个人帮你从构建好的载体做起，重新转细菌，做诱导表达，低温试试

谢谢你！意思是我在操作中有问题么？我又重新挑了另一种蛋白作原核表达，还是菌液包含体都没有

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10楼2016-04-02 00:47:44
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