8楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-03-31 23:33:15
如果前期的工作都正确。考虑一下载体的插入位置，是否能正常转录（有这种情况，标记基因表达了，而目的基因沉默）

10楼: Originally posted by 妞小胖儿 at 2016-04-02 00:47:44
谢谢你！意思是我在操作中有问题么？我又重新挑了另一种蛋白作原核表达，还是菌液包含体都没有
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11楼: Originally posted by 妞小胖儿 at 2016-04-02 00:51:04
谢谢！我用的是最常规的插入位置 xhol EcoR1 怎么看插入片段有没有问题啊？
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12楼: Originally posted by elric at 2016-04-02 01:50:59
看一下会不会IPTG失效了，我之前就遇到这个情况，因为IPTG用量很少，放的时间长了就会失效，借的别人的试试...

13楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-04-02 09:10:48
重组质粒有几个必不可少的序列，还要注意质粒转录的方向。       比如:你目的基因插在启动子之前，那一般不会成功转录，但是标记基因可以表达。
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14楼: Originally posted by 妞小胖儿 at 2016-04-10 20:27:09
您好 我后来换了别人表达成功用的IPTG 然后我发现在OD值 0.6-0.8的时候加入1微升0.1的IPTG 18°过夜。最后只有少量几管菌摇起来了。其他的变得反而十分清亮。您说这是什么问题啊？谢谢！！
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