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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 求助 质粒诱导原核表达总是不成功！
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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 质粒诱导原核表达总是不成功！ 已有2人参与

我把已经构建好的载体转入BL21感受态里后，加入IPTG诱导原核表达，然后跑PAGE发现 无论上清还是包含体內都没有想要的蛋白。
目前鉴定过转入BL21后挑单克隆的菌液，是正确的。也看过测序结果，并没有移码，不知道怎么办了，求教大神！！毕业困难

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1楼 2016-03-27 15:15:25
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 妞小胖儿 at 2016-04-02 00:51:04
谢谢！我用的是最常规的插入位置 xhol EcoR1 怎么看插入片段有没有问题啊？
...

重组质粒有几个必不可少的序列，还要注意质粒转录的方向。       比如:你目的基因插在启动子之前，那一般不会成功转录，但是标记基因可以表达。

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13楼2016-04-02 09:10:48
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zhyk615

木虫 (小有名气)
我的也是，目前纠结

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DODODO！
2楼2016-03-29 09:01:24
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)
包含体？杆菌两头的那个结构吧？

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3楼2016-03-29 16:04:43
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是翻译出问题了
1）RBS还有吗？
2）密码子优化了吗？
3）mRNA的二级结构分析过吗？
4）其他
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我笃信:人定胜天！
4楼2016-03-29 16:16:28
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