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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 质粒诱导原核表达总是不成功! 已有2人参与

我把已经构建好的载体转入BL21感受态里后,加入IPTG诱导原核表达,然后跑PAGE发现 无论上清还是包含体內都没有想要的蛋白。
目前鉴定过转入BL21后挑单克隆的菌液,是正确的。也看过测序结果,并没有移码,不知道怎么办了,求教大神!!毕业困难

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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 妞小胖儿 at 2016-04-02 00:51:04
谢谢!我用的是最常规的插入位置 xhol EcoR1 怎么看插入片段有没有问题啊?
...

重组质粒有几个必不可少的序列,还要注意质粒转录的方向。       比如:你目的基因插在启动子之前,那一般不会成功转录,但是标记基因可以表达。

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13楼2016-04-02 09:10:48
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查看全部 16 个回答

zhyk615

木虫 (小有名气)

DODODO!
2楼2016-03-29 09:01:24
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)

包含体?杆菌两头的那个结构吧?

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3楼2016-03-29 16:04:43
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是翻译出问题了
1)RBS还有吗?
2)密码子优化了吗?
3)mRNA的二级结构分析过吗?
4)其他
我笃信:人定胜天!
4楼2016-03-29 16:16:28
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