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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

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虫号: 4540044
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专业: 免疫生物学

[求助] 求助质粒诱导原核表达总是不成功！已有2人参与

我把已经构建好的载体转入BL21感受态里后，加入IPTG诱导原核表达，然后跑PAGE发现无论上清还是包含体內都没有想要的蛋白。
目前鉴定过转入BL21后挑单克隆的菌液，是正确的。也看过测序结果，并没有移码，不知道怎么办了，求教大神！！毕业困难

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1楼2016-03-27 15:15:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

elric

新虫 (著名写手)

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虫号: 542305
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性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

引用回帖:

14楼: Originally posted by 妞小胖儿 at 2016-04-10 20:27:09
您好我后来换了别人表达成功用的IPTG 然后我发现在OD值 0.6-0.8的时候加入1微升0.1的IPTG 18°过夜。最后只有少量几管菌摇起来了。其他的变得反而十分清亮。您说这是什么问题啊？谢谢！！
...

会不会是温度过低了，20度或24度试试呢，变得清亮，可能是没有长吧