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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 质粒诱导原核表达总是不成功! 已有2人参与

我把已经构建好的载体转入BL21感受态里后,加入IPTG诱导原核表达,然后跑PAGE发现 无论上清还是包含体內都没有想要的蛋白。
目前鉴定过转入BL21后挑单克隆的菌液,是正确的。也看过测序结果,并没有移码,不知道怎么办了,求教大神!!毕业困难

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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by elric at 2016-04-02 01:50:59
看一下会不会IPTG失效了,我之前就遇到这个情况,因为IPTG用量很少,放的时间长了就会失效,借的别人的试试...

您好 我后来换了别人表达成功用的IPTG 然后我发现在OD值 0.6-0.8的时候加入1微升0.1的IPTG 18°过夜。最后只有少量几管菌摇起来了。其他的变得反而十分清亮。您说这是什么问题啊?谢谢!!

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14楼2016-04-10 20:27:09
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zhyk615

木虫 (小有名气)

DODODO!
2楼2016-03-29 09:01:24
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)

包含体?杆菌两头的那个结构吧?

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3楼2016-03-29 16:04:43
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是翻译出问题了
1)RBS还有吗?
2)密码子优化了吗?
3)mRNA的二级结构分析过吗?
4)其他
我笃信:人定胜天!
4楼2016-03-29 16:16:28
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