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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 质粒诱导原核表达总是不成功! 已有2人参与

我把已经构建好的载体转入BL21感受态里后,加入IPTG诱导原核表达,然后跑PAGE发现 无论上清还是包含体內都没有想要的蛋白。
目前鉴定过转入BL21后挑单克隆的菌液,是正确的。也看过测序结果,并没有移码,不知道怎么办了,求教大神!!毕业困难

发自小木虫IOS客户端
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elric

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以尝试下让另一个人帮你从构建好的载体做起,重新转细菌,做诱导表达,低温试试
9楼2016-04-01 02:38:28
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zhyk615

木虫 (小有名气)

DODODO!
2楼2016-03-29 09:01:24
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)

包含体?杆菌两头的那个结构吧?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-03-29 16:04:43
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是翻译出问题了
1)RBS还有吗?
2)密码子优化了吗?
3)mRNA的二级结构分析过吗?
4)其他
我笃信:人定胜天!
4楼2016-03-29 16:16:28
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