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妞小胖儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 质粒诱导原核表达总是不成功! 已有2人参与

我把已经构建好的载体转入BL21感受态里后,加入IPTG诱导原核表达,然后跑PAGE发现 无论上清还是包含体內都没有想要的蛋白。
目前鉴定过转入BL21后挑单克隆的菌液,是正确的。也看过测序结果,并没有移码,不知道怎么办了,求教大神!!毕业困难

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MarchZR

银虫 (小有名气)

这个原因有很多种,我也不想一一分析了,说到底还是经验不足啊!但是结果就是蛋白不表达:建议参考资料:原核不表达或表达为什么不在上清:7点几兆的,有点大http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html
6楼2016-03-30 10:19:10
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zhyk615

木虫 (小有名气)

DODODO!
2楼2016-03-29 09:01:24
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)

包含体?杆菌两头的那个结构吧?

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3楼2016-03-29 16:04:43
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hanjun80

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是翻译出问题了
1)RBS还有吗?
2)密码子优化了吗?
3)mRNA的二级结构分析过吗?
4)其他
我笃信:人定胜天!
4楼2016-03-29 16:16:28
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