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lcjiaojiao

新虫 (小有名气)

[求助] 液相不出峰的原因已有7人参与

做舒尼替尼液相,C18柱,流动相为乙腈:水=65;35,流速为1ml/min,进样40分钟后仍未出峰,只有溶剂峰,求助各位大神可能的原因有哪些?
调整流动相极性,乙腈100%,终于出峰了,但是出峰特别小是为什么?怎么改善呢?标准品浓度为0.2mg/ml

液相不出峰的原因
液相.jpg
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ly2199

专家顾问 (正式写手)

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lcjiaojiao: 金币+2 2016-03-30 16:44:29
引用回帖:
7楼: Originally posted by lcjiaojiao at 2016-03-14 13:04:52
安捷伦1260,检测器为紫外。
请问波长可以超过400nm吗?...

如果HPLC用的紫外检测器的话,首先得通过UV-Vis测试一下样品溶液的最大吸收波长,吸收波长设定不合适的话,对于你样品的灵敏度影响非常大,也就是你说的样品特别小的问题。
关于流动相比例问题,你开始用的是65%的乙腈,那你有没有试过80%的乙腈?如果没有的话,可以试一下。再就是你的C18柱子是多长的?如果是25cm的话,可以换一根短一点的柱子。
9楼2016-03-14 14:49:31
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小芋头忽忽

新虫 (小有名气)

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lcjiaojiao: 金币+2 2016-03-30 16:45:32
楼上说的都挺靠谱的,再补充一下,可以试试提高柱温,具体温度要看你样品要求了。有时候到60度都是可以的。甲酸换三氟乙酸、更换短柱、检测流动相的吸收光、走一下乙腈和水的梯度流动相,都可以试试的
祝好运
10楼2016-03-14 15:46:30
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老制剂

金虫 (小有名气)

换一别的品牌色谱柱,一个品牌色谱柱不是万能的,不管他便宜还是贵,有些品种样品是调柱子的

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12楼2016-03-15 18:48:02
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晴川沥沥

新虫 (小有名气)

如果拖尾很严重,考虑换换柱子,安捷伦的柱子或资生堂的C18,。或者加点三乙胺等扫尾剂,或者调一下流动相PH

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13楼2016-03-15 19:40:48
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忍冬1018

新虫 (小有名气)

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lcjiaojiao: 金币+2 2016-03-30 16:45:58
测一下你的产品的水溶液的pH值,选择pH左右两个点的流动相pH进行试验,可以先试验10mmol的盐,看看是否有效果
16楼2016-03-16 10:17:15
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学术巨星

专家顾问 (正式写手)

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lcjiaojiao: 金币+2 2016-03-30 16:46:10
原流动相不变,水相加0.3%三氟乙酸试试。

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2楼2016-03-14 11:09:30
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lcjiaojiao

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by archbishop at 2016-03-14 11:54:18
首先,这个方法以前有人用过吗?能确定是出峰的吗?
其次,可以调整pH、加缓冲盐。你可以查查文献,参考一下别人的方法。

文献有的,现在乙腈已经是100%了,怎样加缓冲盐呢?
6楼2016-03-14 13:03:59
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玻璃珠

新虫 (初入文坛)

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lcjiaojiao: 金币+2 2016-03-30 16:45:50
lcjiaojiao: 金币+2 2016-03-30 16:46:41
你换个检测器试试,用DAD检测器试试
14楼2016-03-16 08:42:45
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晴川沥沥

新虫 (小有名气)

峰有点前沿,不用加三乙胺了,可以考虑梯度洗脱看看,或者流动相不用甲酸,试试加0.01或者0.02MOL/L磷酸二氢钠/钾(PH3.0),加缓冲盐也许峰形能好。保留时间靠前可以减少乙腈的比例

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18楼2016-03-16 12:23:20
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晴川沥沥

新虫 (小有名气)

如果是含量测定,保留时间10min或15min比较好,减少乙腈比例可以使保留时间靠后

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19楼2016-03-16 12:29:54
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普通回帖

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

首先,这个方法以前有人用过吗?能确定是出峰的吗?
其次,可以调整pH、加缓冲盐。你可以查查文献,参考一下别人的方法。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
3楼2016-03-14 11:54:18
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wenwang

铁杆木虫 (著名写手)

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lcjiaojiao: 金币+2 2016-03-30 16:46:20
不知道你用的什么检测器,是不是检测器没调好啊.
4楼2016-03-14 12:06:14
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lcjiaojiao

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 学术巨星 at 2016-03-14 11:09:30
原流动相不变,水相加0.3%三氟乙酸试试。

之前水相加0.1%甲酸,流动相为乙腈:水=65;35.一直没有出峰,上调乙腈比例至100%才出了如图所示的小峰,有什么改善方法吗?
5楼2016-03-14 13:02:44
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lcjiaojiao

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wenwang at 2016-03-14 12:06:14
不知道你用的什么检测器,是不是检测器没调好啊.

安捷伦1260,检测器为紫外。
请问波长可以超过400nm吗?
7楼2016-03-14 13:04:52
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baobaoy

新虫 (初入文坛)

超过400就是可见了,不是紫外了

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8楼2016-03-14 13:07:13
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