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In-fusion 克隆，做了很久没有出结果，求助已有10人参与
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最近一直在做in-fusion 克隆连接，片段插入载体（14300bp），目的片段1023bp。 买的In-Fusion Cloning Kit货号是639649，只包含一支50个反应的5×premix，一支pUC19线性化载体和一个2kb的片段。我按照说明书的方法配好反应混合液之后（载体150-200ng，目的片段80ng，载体和目的片段各1 uL,5×premix 1uL,总体系51uL），50℃反应15min，然后转化DH5α感受态细胞。转化至感受态细胞的的反应液的量2uL、3uL、5uL均用过。但是第二天发现只有阳性的pUC19正常长起了阳性单菌落，我的克隆样品一个菌都不长。引物同源序列片段检查了很多次，没有问题。载体和目的片段都是凝胶回收的纯化的。现在不知道问题出在哪里了，请有经验的虫友们出出招，多谢了！ |
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