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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » In-fusion 克隆，做了很久没有出结果，求助
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你的蛔虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by phyter at 2016-02-21 09:17:32
可以试试摩尔比1:3
overlap  20bp
载体150ng  ok

感谢楼主回复，我会一试的
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11楼2016-02-23 13:41:57
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你的蛔虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 轩辕漪 at 2016-02-21 14:09:49
这么短，酶切连接成功率很高的，你的载体太大，如果载体之内，或者载体与目的片段直接同源性比较高，都可能被重组。同源重组被吹的有点过了。你如果执意要用这种方法，重组时间延长到一个小时。你的载体比较大，片段 ...

谢谢各位虫友们提供的建议，我试用了重组时间延长至30min，不过还是一个菌也没长。关于大家说的换试剂盒，因为现在在日本，国内的试剂盒在这边买不到。大家还有没有可以想到的别的可能会存在问题的点，期待各位大侠的指点
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12楼2016-02-24 09:06:21
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你的蛔虫

新虫 (初入文坛)
谢谢各位虫友们提供的建议，我试过了延长重组时间至30min，依然是一个菌也没长。关于换试剂盒，因为现在在日本做试验，大家说的那些试剂盒在这里买不到。只能用这个试剂盒。甚至，我还用T4酶也连接过，况且是单酶切，也没有去磷酸化，直接连的，目的片段和载体同样也是胶回收纯化，但也是一个菌都没长。希望大家在给出出招，先在此谢过了
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13楼2016-02-24 09:15:37
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你的蛔虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by erryzhen at 2016-02-19 13:53:02
你的载体与目的片段的重复序列是多少呢？

想问一下楼主，同源臂延长至30bp可以吗
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14楼2016-02-24 14:15:44
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chocolater

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lz 最后怎么做了呢？我也出现类似问题了。。
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15楼2016-06-08 00:30:37
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俊锋

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
研友，现在也还在做in-fusion实验么？后来做成功了吗？做in-fusion实验，我也同样遇到现在的问题，连接上去的时候一直出现连接不成功，求支支招
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16楼2016-06-08 09:50:42
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匿名

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17楼2016-07-25 22:53:15
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放浪形骸1

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先保证转化没有问题，其次我每次做in fusion都把时间延长至，1h左右。

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18楼2016-08-23 23:10:51
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