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毕赤酵母蛋白表达纯化 已有3人参与
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各位大神，如图所示，只看最右边的两个泳道，第一个是marker，倒数四个条带的分子量分别是10，15，25，35kD，第二个泳道是表达的目的条带，过了一个镍柱，1、按说应该就是目的条带了，空载是没有这个条带的，这个胶上没有跑空载，我还做过western，也能杂出目的条带，但是目的蛋白理论分子量本来应该是18kD左右，用原核表达出来的也是18kD左右，但是现在酵母表达出来的都在25kD附近了，好大，载体是ppiczαA，菌株是KM71H；2、过柱子纯化后的蛋白跑出来老是这个样子，显得好宽，我降低浓度后跑胶也是这么个样子，只是颜色浅一点，不知道是咋回事？胶浓度是15%的；3、而且还有一个现象是，有几次染色后脱色，时间脱久了后竟然把条带给脱没了，不知道是不是染色液用的次数太久了。希望有经验的大神帮忙解答一下，多谢啦 IMG_0854.jpg |
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 蛋白表达纯化鉴定精华 |
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9楼2016-02-20 11:53:38
2楼2016-01-24 18:04:37
【答案】应助回帖
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易农植保: 金币+10, ★★★很有帮助, 嗯嗯 2016-01-26 20:33:20
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您可以先试试看有没有活性，要是没有的话用去糖基化酶试试 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-01-24 18:06:47
4楼2016-01-24 18:08:01