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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

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[求助] 关于大肠杆菌诱导表达已有2人参与

用的是pet29b，我的蛋白37度3h诱导后全部是包涵体，很明显，上清基本无。然后22度诱导11h后沉淀中没有目的蛋白，上清中少，但比之前要多。这是不是说明，我应该在37度和22度之间摸条件呢？还有我听说低iptg有助于降低包涵体，但是为何我觉得1mM的好像比0.1mM和0.02mM的好像上清中要多一点呢
还有就是，如果大体积诱导，多少升细菌液合适呢？
问题比较多，谢谢各位啦

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1楼2016-01-19 14:38:14

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a2703521

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 梦的金色城堡 at 2016-01-21 14:28:22
我又做了26度30度过夜的，比较看，觉得22度0.5mM好像多一点，我打算用20度大体积诱导纯化，做完就可以回家啦，所以这一次挺重要的，你说的过夜是多少小时呢？如果我20度诱导的话，你觉得诱导剂浓度0.5合适不？时间 ...

20℃诱导，过夜一般超过15h就可以了，如果蛋白稳定性好的话可以适当延长时间，不过最好不要超过20h，不然很容易溶菌，而且氨苄抗性的菌种超过20h还容易长杂菌，会影响蛋白的质量和产量。0.5的诱导剂用量差不多了，如果条件可以的话也可以做几个梯度的浓度做比较。