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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌诱导表达 已有2人参与

用的是pet29b,我的蛋白37度3h诱导后全部是包涵体,很明显,上清基本无。然后22度诱导11h后沉淀中没有目的蛋白,上清中少,但比之前要多。这是不是说明,我应该在37度和22度之间摸条件呢?还有我听说低iptg有助于降低包涵体,但是为何我觉得1mM的好像比0.1mM和0.02mM的好像上清中要多一点呢
还有就是,如果大体积诱导,多少升细菌液合适呢?
问题比较多,谢谢各位啦
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生物-医药
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-20 16:43:53
22℃诱导11h时间有点短了,最好过夜,15h以上应该可以。诱导剂用量最好别太多,不然容易出现包涵体,根据情况可以适当调整一下。

我又做了26度30度过夜的,比较看,觉得22度0.5mM好像多一点,我打算用20度大体积诱导纯化,做完就可以回家啦,所以这一次挺重要的,你说的过夜是多少小时呢?如果我20度诱导的话,你觉得诱导剂浓度0.5合适不?时间14—16h?多谢啦

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生物-医药
6楼2016-01-21 14:28:22
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

怎么没人理我吗?
生物-医药
2楼2016-01-19 17:59:06
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eleep

新虫 (初入文坛)

听意思是为了上清蛋白多?我们都是要沉淀啊,听不懂

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-20 08:41:54
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梦的金色城堡

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by eleep at 2016-01-20 08:41:54
听意思是为了上清蛋白多?我们都是要沉淀啊,听不懂

哦哦,要沉淀的话需要复性吧,我们是要上清

发自小木虫IOS客户端
生物-医药
4楼2016-01-20 09:50:43
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